告別Matrigel，GelMA生物墨水用于腸腫瘤類器官構建及藥物評價

來源： EFL生物3D打印與生物制造

抗腫瘤藥物評價對于藥物研發(fā)和臨床指導至關重要。腫瘤類器官模型由于能夠更好地模擬真實腫瘤組織，并且時間和經(jīng)濟成本較低，彌補了細胞系和異種移植模型的不足，越來越受到關注。然而，目前基于Matrigel的腫瘤類器官培養(yǎng)由于凝膠化速度慢、機械強度低，在與高通量工程方法的匹配方面存在局限性。

近日，中山大學劉杰教授等利用豬脂肪組織脫細胞外基質（adECM）和GelMA開發(fā)了一種新型的結直腸癌類器官培養(yǎng)復合生物墨水。該復合生物墨水在腸腫瘤類器官的有效培養(yǎng)和3D生物打印方面均表現(xiàn)出優(yōu)異的性能，為促進腫瘤類器官在藥物開發(fā)和臨床指導中的應用提供了良好示范。相關工作以題為“3D bioprinting platform development for highthroughput cancer organoid models construction and drug evaluation”發(fā)表于《Biofabrication》上。

圖1 利用生物3D打印技術從患者來源的腫瘤樣本中提取類器官，構建高通量類器官藥物篩選平臺示意圖   

考慮到GelMA具有快速穩(wěn)定的光交聯(lián)性能，加上源自明膠的良好生物相容性，作者采用丙烯酸化的方法，以甲基丙烯酸酐對明膠進行改性，成功制備了GelMA。脫細胞細胞外基質(dECM)是從特定動物組織中去除細胞后得到的凝膠材料。這種獨特的材料可以最大限度地恢復各種組織成分及其比例，為細胞提供高度模擬的體外生長環(huán)境，提高體外病理模型的真實性和可靠性，本文作者在之前工作基礎上制備了來自豬脂肪組織的 dECM 材料。經(jīng)過一系列前期驗證，優(yōu)化了兩種組分以1：1的比例混合，以獲得易于應用的復合生物墨水。制備的GelMA/adECM復合生物墨水主要依靠GelMA帶來的光交聯(lián)特性進行凝膠化，并借助adECM的熱敏特性進行凝膠化，使其凝膠化速度和凝膠強度遠遠優(yōu)于依靠熱敏特性進行凝膠化的傳統(tǒng)Matrigel。

圖2 復合生物墨水的熱敏性能及光交聯(lián)性能

通過對各種打印參數(shù)的綜合測試，驗證了復合生物墨水的打印性，從而確定了后續(xù)打印的最佳參數(shù)組合。實驗結果表明，3D生物打印可以在96孔多孔板的每個孔中精確地打印出體積相同的水凝膠球，并且通過選擇不同的生物墨水進行打印，可以精確地得到預期的打印圖案，有利于后期選擇多種材料或細胞構建復雜體系。   

圖3 使用復合生物墨水進行3D生物打印

對于需要用于藥物評價篩選的腫瘤類器官，通常在打印后3~5天內(nèi)完成藥敏實驗。在5天的培養(yǎng)期內(nèi)，打印后的復合生物墨水中活細胞的比例（96.90%）僅略低于Matrigel中的活細胞比例（99.26%），從而表明復合生物墨水足以滿足藥物評價實驗中類器官培養(yǎng)的要求。

圖4 在復合生物墨水中生物打印和培養(yǎng)的結直腸癌類器官死活狀態(tài)

奧沙利鉑（OX）作為目前治療結直腸癌的一線藥物之一，通過與DNA和RNA形成交聯(lián)發(fā)揮抗腫瘤作用。選擇OX作為模型藥物，分析復合生物墨水構建的模型與傳統(tǒng)模型患者來源的結直腸癌類器官藥物敏感性的差異，以及該模型與基于細胞系的2D培養(yǎng)模型的差異。結果表明，在相同的藥物濃度和作用時間下，兩種類器官模型的細胞存活率均明顯高于2D培養(yǎng)模型（Matrigel中為65.80%，復合生物墨水中為74.35%），這一非常顯著的差異在過去已被廣泛報道，表明腫瘤類器官在藥物評估的真實性方面遠遠優(yōu)于傳統(tǒng)的2D模型。   

圖5 藥物敏感性測試

文章來源：
https://iopscience.iop.org/article/10.1088/1758-5090/ad51a6